中药饮片（processed pieces of Chinese materia medica）是中药材经炮制加工后可用于中医临床的家具，很多中药饮片来自于自然植物、虫豸、动物或矿物俺去也新网，本身带有多半微生物。中药饮片着手的各种性与加工、运输和收藏的悠闲性使得中药饮片极易受到微生物沾污，并已影响到饮片本身和其下流中成药家具的质料和安全性[1， 2， 3， 4]。由于中药饮片样品的非凡性，其微生物测验花样与一般化学药和中成药在取样量、测验花样和评价法式上均有不同。《欧洲药典》8.0版（EP 8.0）和《日本药典》16版（JP 16）中已明确收载了中草药（自然药物）微生物适度的查抄花样和适度法式[5， 6]。
诚然，《上海市中药炮制法式》2008版也曾收载了965个中药饮片品种，《中国药典》2010版一部中收载药材593种和饮片822种，但除径直进口的中药品种外王人未要领微生物适度法式，也莫得针对性的微生物查抄花样[7]。我国中药饮片微生物查抄花样和法式始终处于缺失状态。中药饮片的炮制经过多数较为简易，通过传统的挑拣和切制等传统工艺极可能带入新的沾污。即使经过加热或乙醇处理等工艺也不可满盈去除潜在的微生物致病性风险[8]，尤其是耐热菌和各种微生物的毒素残留[9， 10， 11]。中药饮片的微生物沾污情况未能取得应有的良善，导致饮片中微生物沾污相关的安全评价缺失。本考虑通过对上海地区坐褥的常见的10种中药饮片微生物沾污情况的造访，初步掌持中药饮片的生物沾污负载水平，了解中药饮片的微生物危害因子，为中药饮片微生物沾污风险评估和炮制经过中的微生物按捺提供数据守旧。
2 花样与遵守 2.1 中药饮片样品集合本考虑集合上海地区阛阓上常见的10种中药饮片觉得94批次，由上海5家中药饮片坐褥厂家提供，划分为上海华宇药业有限公司（HY）、上海青浦中药饮片厂（QP）、上海康桥中药饮片厂（KQ）、上海虹桥中药饮片厂（HQ）和上海养和堂中药饮片厂（YHT）（表 1）。其中山慈菇集合到4个批次，其余9个品种均集合到10个批次，每批次样品量不少于100 g。样品均由笔者按《中国药典》2010年版各药材项下相关要求已然，遵守见表 1。
表 1 试验所用中药饮片样品
Table 1 Processed pieces of CMM tested in this study
2.2 微生物计数
2.2.1 计数花样
称取25 g样品至无菌拍打袋中，加入pH 7.0氯化钠-缓冲卵白胨水溶液225 mL，用均质器拍打1 min，静置1 min后取清液为1∶10供试液。按《中国药典》2015年版第3公示稿中“非无菌家具微生物适度查抄：微生物计数法”（1105）查抄需氧菌总和计数（TAMC）与霉菌和酵母菌总和计数（TYMC）。其中，TAMC查抄采用1∶10供试液过火之后的5个流畅的10倍梯度稀释液，TYMC（培养基中含庆大霉素0.1 g/L）查抄采用1∶10供试液过火之后的4个流畅10倍梯度稀释液。另取上述1∶10供试液10 mL，立即放入滚水浴中处理30 min，赶快冷却至室温。取经加热处理后的供试液，按TAMC查抄花样测定耐热菌数。
2.2.2 需氧菌总和计数中药饮片詈骂无菌家具，在坐褥加工经过中微生物按捺措施不严格，因此在一齐样品中均检出需氧性微生物（表 2）。样品的TAMC遵守介于101～108 CFU/g（图 1）。样品连翘和山慈菇的TAMC计数遵守要高于其他饮片品种，平均沾污量大于105 CFU/g。川楝子（炒）的TAMC遵守是扫数中药饮片中最低的，平均沾污量为102 CFU/g。在川芎、甘草和山慈菇中，不同批次样品间的TAMC遵守互异可达到4个数目级以上。
表 2 中药饮片样品微生物技俩测验遵守
Table 2 Microbial results of processed pieces of CMM
2.2.3 霉菌和酵母菌总和计数
中药饮片中霉菌和酵母菌亦然常见的微生物沾污源[3]。本实验中除山药、炙甘草和醋延胡索有部分批次样品未检出霉菌和酵母菌外，其余7种饮片均检出霉菌或酵母菌（表 2），总体检出率为90.4%（85/94）。样品的TYMC沾污进度介于101～107 CFU/g。连翘中的TYMC遵守最高，平均沾污量接近105 CFU/g。不同批次山慈菇样品之间的互异较大，最低沾污量为101 CFU/g，而最高不错达到107 CFU/g（图 2）。
2.2.4 耐热菌计数本实验中扫数种类的中药饮片均经100 ℃煮沸处理30 min后均能检出活性微生物，耐热菌总体检出率为76.6%（72/94），耐热菌沾污进度介于100～104 CFU/g（图 3）。耐热菌的存活是中药饮片加工成中成药或煎煮汤药后家具变质恶臭、导致药效着落的主要原因。微生物在药物中滋长产生的代谢产物也会对患者健康产生未知的安全隐患。
2.3 按捺菌查抄 2.3.1 查抄花样按“2.2.1”中花样制备供试液，其余花样按《中国药典》2015年版第3公示稿“非无菌家具微生物适度查抄：按捺菌查抄法”（1203）的要领进行梵衲菌、大肠埃希菌、耐胆盐革兰阴性菌（MPN法）、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和白色念珠菌的查抄。其中，对检出大肠埃希菌阳性的样品按EP 8.0中大肠埃希菌MPN定量花样重新查抄。
划分按照食物安寰球度法式GB 4789.5-2012和GB 4789.11（2010年征求见识稿）进行志贺氏菌和溶血性链球菌的查抄。
2.3.2 耐胆盐革兰阴性菌查抄对耐胆盐革兰阴性菌采用MPN定量花样进行查抄，有21批样品检出阳性遵守（表 3），占一齐样品的22.3%（21/94）。其中，最高沾污量可到达106＜N＜107 MPN/g。耐胆盐革兰阴性菌在103～106 MPN/g检出的样品占一齐耐胆盐革兰阴性菌阳性样品的76.2%（16/21）。
表 3 中药饮片样品中耐胆盐革兰阴性菌计数遵守
Table 3 Bile-tolerant Gram-negative bacteria results of processed pieces of CMM
2.3.3 其他按捺菌查抄
一齐94批样品中仅有1批山慈菇样品检出大肠埃希氏菌阳性，经MPN定量花样检测遵守为102 MPN/g＜N＜103 MPN/g。扫数样品均未检出梵衲菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、志贺氏菌和溶血性链球菌。
2.4 微生物适度法式判断将94批中药饮片微生物测验遵守划分与EP 8.0、JP 16和USP 37中相关的微生物适度法式进行比较。其中，EP 8.0“5.1.8”的A类家具（用于滚水浸出和煎煮的含有草药因素和含（或不含）有辅料的草药家具）、JP 16“G4 Microorganisms”中I类家具（需经滚水处理的家具）和USP 37膳食补充剂“2023”的“含植物因素过火成品”（使用前用滚水处理的植物）中对饮片微生物适度法式进行了要领。
西西掰阴艺术按EP 8.0法式判断本次中药饮片样品的不对格率为5.3%（5/94）；按JP 16法式判断不对格率为18.1%（17/94）；按USP 37法式判断不对格率为23.4%（22/94）（表 4）。上述3个国度和地区的药典对中药类品种判断法式各不疏导，但王人对中药相关家具的微生物适度法式漠视了要求。与化学药品的坐褥彭胀严格的GMP审查和监管不同，我国中药饮片的加工水平低，经过按捺和风险按捺体系目下无法有用达到异邦药典的适度要求，亦然我国药典迟迟无法激动中药饮片微生物适度法式制定的试验原因。
表 4 欧洲、日本和好意思国药典中草药（自然药物）相关微生物适度法式比较
Table 4 Comparison on microbial limit standards related to herbal drug (natural drug) in EP，JP，and USP
2.5 加热处理对饮片中微生物负载的影响
阐明炮制工艺中是否触及加热处理花样，将10种饮片分红2类。第Ⅰ类为炮制工艺不触及加热处理的中药饮片；第II类为炮制工艺触及加热处理的中药饮片，包括蜜炙、醋制、清炒、炒制、蜜炒、醋炒、盐炒和蒸制等。本实验中，采用IBM SPSS Statistics 19统计学软件对Ⅰ类和Ⅱ类炮制工艺样品的微生物计数进行配对t测验。其中，TAMC和耐热菌计数在I类和II类炮制工艺样品之间有极显耀互异（P＜0.01）（表 5），讲明第II类中药饮片［炙甘草、醋延胡索和川楝子（炒）］的TAMC和耐热菌计数均举座低于第I类家具。触及加温处理的炮制工艺或者有用申斥中药饮片中细菌类沾污。然则，经过第Ⅱ类工艺处理的饮片也存在高微生物沾污的情况，可能的原因是加热工艺不可有用杀灭微生物（尤其是霉菌和酵母菌）；饮片中耐热菌的存在和衍生；贮存和运输等经过中引入的外源性沾污。
表 5 Ⅰ类和Ⅱ类炮制工艺微生物负载配对t测验
Table 5 Statistical analysis on bio-burden of Type Ⅰ and Ⅱ process by t-test
3 盘考
与中药材和中成药质料法式比拟，中药饮片的微生物资量按捺被始终忽视[12]。很多考虑标明中药饮片盛大的受到多种微生物的沾污[2， 13]，由于膺惩监控和造访，其微生物沾污进度也曾相配严重[14]。在对临床袋装饮片进行造访的遵守泄漏，有10%以上的家具含有向上103 CFU/g的存活微生物沾污[15， 16]。在实质沾污中，有多半耐热微生物及多种耐热毒素（如：金黄色葡萄球菌肠毒素和黄曲霉素等）不错在饮片炮制和煎煮后保存活性，是患者用药的弘大隐患[9， 10， 11]。有考虑标明，中药饮片在制作成袋装煎煮液后仍有不同进度的微生物沾污，是导致饮片汤剂保质期裁减的主要原因[17]。中药饮片看成中成药和中药汤剂等的最主要中间体需要国度层面制定更有用的按捺法式进行法式。
中药在日本和欧盟王人被视为药品进行惩处，但在好意思国仅看成养分和膳食补充剂进行惩处，即保健品。但上述3个国度或地区的药典法式中，联接了中药的加工经过和使用花样，虽未明确讲明适用于中药饮片，但法式要领的鸿沟已将其涵盖。这些法式中均有对TAMC、TYMC和相关按捺菌的查抄技俩，给坐褥和加工经过漠视了较为严格的要求。由于膺惩对中药饮片中微生物沾污负载的寰球性、系统性的统计数据和考虑，同期研讨到中国中药产业的发展水和善坐褥近况，《中国药典》还无法向异邦药典相通对中药饮片中TAMC和TYMC的适度作念出协调要领。但在中药饮片中增多对微生物适度的要领是法式中药产业坐褥安全性的势必趋势。目下，在《中国药典》2015版公示稿中也曾对梵衲菌和耐胆盐革兰阴性菌进行了要领。在《中国药典》增多中药饮片微生物沾污适度法式仍然需要资格一段技巧的数据蕴蓄和分析的经过。
目下，我国在饮片加工企业坐褥车间内还未形成有用的微生物沾污按捺体系，不管是原料按捺、厂房环境和东谈主员操作王人极有可能引入各式微生物沾污。诚然，我国有GMP对中药饮片厂的环境和条款进行接续，但要求过于昔日，无法有用按捺外源性沾秽物的混入。我国的饮片加工企业举座坐褥卫生条款较差，膺惩对环境的有用按捺，一朝外源性致病因子混入，会变成无法按捺的潜在隐患。因此，采用卫生指引菌计数（TAMC、TYMC和耐胆盐革兰阳性菌）看成评价样品加工经过中受微生物沾污进度的进犯蓄意，或者信得过、有用地反应目下中药饮片在各个要害的卫生景象，是对中药饮片家具卫生水平的初步评估。
此外，本实验虽未检出梵衲氏菌和金黄色葡萄球菌等致病微生物，但并不代表此类致病菌不会存在于饮片样品中。目下，《中国药典》要领采用TSB肉汤培养基进行第一步增菌是为了让受毁伤的微生物收回生力，但在较高的微生物沾污配景下，非选拔性的增菌也增多了对方向致病微生物滋长的打扰，申斥了检出率。本实验对10种中药饮片的致病菌技俩王人按《中国药典》2015年版公示稿进行了花样适用性查抄，发当今选拔性平板上虽有方向按捺菌的典型菌落出现，但配景打扰相配严重，建议《中国药典》在中药饮片按捺菌查抄经过中安妥增多培养基的选拔性，以减少配景菌的打扰，提升方向按捺菌的检出率。
本考虑对上海地区坐褥的10种中药饮片进行微生物技俩的查抄，发现我国中药饮片举座卫生水平较低，微生物负载较高，即使经加热炮制处理，仍有多半残留微生物存活，是中药饮片使用中的一大安全隐患。建议进一步开展中药饮片微生物危害的风险评估责任俺去也新网，完善中药饮片微生物相关法式的制定，强化中药饮片坐褥经过惩处和按捺，保险中药饮片的使用安全。